БИОХИМИЯ, 2011, том 76, вып. 6, с. 816–828
УДК 577.212.3
Экспрессия, очистка и характеристика гипотетического Rad3 Candida albicans, продукта orf19.7119
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Candida albicans, Rad3, репарация ДНК, Fe-S кластер, функциональная комплементация.
Аннотация
Инвазивные инфекции Candida albicans угрожают жизни больных иммуносупрессией. Для поддержания целостности и особенностей генома и защиты от атаки макрофагов C. albicans использует эксцизионную репарацию нуклеотидов (ЭРН). Rad3 хеликаза – это компонент TFIIH комплекса, который играет роль в транскрипции и каскаде реакций ЭРН. Данные, полученные при исследованиях различных организмов (от архей до человека), показали, что для функциональной активности хеликазы Rad3 необходима консервативная структура, включающая железосодержащий домен. Однако ни одной работы по изучению белка Rad3 C. albicans до сих пор не опубликовано. В настоящем исследовании гипотетический C. albicans Rad3 (CaRad3) клонировали в составе orf19.7119 генома Candida. Белок CaRad3 был оверэкспрессирован, выделен и очищен из E. coli и S. cerevisiae с помощью Ni-NTA колонки и эксклюзионной колонки для физико-химической и функциональной характеристики. С помощью ЭМР и спектрометрического анализа доказано, что очищенный CaRad3 имеет Fe-S кластер. Также обнаружено, что CaRad3 проявляет хеликазную активность на двухцепочечной ДНК. Кроме того, показано, что CaRad3, очищенный из дрожжей, был N-гликозилирован и комплементировал дефекты как в каскаде реакций ЭРН, так и транскрипции. Эти данные позволяли сделать предположение, что хеликаза Rad3 C. albicans является продуктом гена orf19.7119.