БИОХИМИЯ, 2011, том 76, вып. 5, с. 724–730
УДК 577.112:576.535.2
Кинетика изменения шаперонной активности белков Hsp70 и Hdj1 в клетках миелоидной лейкемии человека U-937 после теплового или лекарственного прекондиционирования
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Hsp70, Hdj1, шаперонная активность, индукторы шаперонов, ацетилглюкозиды, эхинохром.
Аннотация
Проанализирована кинетика шаперонной активности белков Hsp70 и Hdj1 после обработки премоноцитов человека U-937 тепловым шоком и трисацетилглюкозидом эхинохрома U-133. Для измерения шаперонной активности обоих белков разработан тест на узнавание и связывание ими денатурированного белка. С помощью этого теста можно одновременно оценивать шаперонную активность в больших массивах проб, представляющих собой клеточные или тканевые экстракты. Содержание обоих шаперонов в клетках оценивали также с помощью иммуноблоттинга. Количественные оценки, полученные с использованием двух независимых тест-систем, совпадают; этот факт свидетельствует о том, что субстратсвязывающая способность изменяется пропорционально количеству шаперона в белковой смеси. Поэтому разработанный нами тест может применяться для высокопроизводительного скрининга различных лекарств, активирующих шаперонные механизмы клетки. Анализ количества и активности двух шаперонов в клетках в динамике ответа на стимулирующие воздействия теплового шока и препарата U-133 показал, что оба фактора вызывают накопление шаперонов со сходной кинетикой. Сделан вывод, что лекарственное прекондиционирование достигается с эффективностью, близкой к гипертермической, а длительность сохранения активных шаперонов на высоком уровне составляет не менее 1,5 сут.