БИОХИМИЯ, 2011, том 76, вып. 4, с. 590–602
УДК 577.152.3
Олигопептидаза В из Serratia proteamaculans. II. Энзиматическая характеристика – субстратный анализ, влияние ионов кальция, рН- и температурная зависимость
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: олигопептидаза В, Serratia proteamaculans, психрофильные ферменты, субстратный анализ, мелиттин, рН-зависимость.
Аннотация
Определены ферментативные свойства ранее неизвестной олигопептидазы В (OpdB) из психротолерантного грамотрицательного микроорганизма Serratia proteamaculans (PSP). Проведен анализ PSP c использованием серии р-нитроанилидных субстратов, изучено влияние ионов кальция на активность этого фермента. Для исследования воздействия PSP на олигопептиды проведен гидролиз мелиттина. Определен рН и кажущийся температурный оптимум активности PSP. Обнаружено, что PSP обладает рядом сходных свойств с OpdB из других источников, содержащих два остатка Asp/Glu в S2-центре, в то же время значительно от них отличаясь. S2-центр PSP содержит лишь один остаток Asp460. Вторичная специфичность PSP имеет ряд особенностей: необычное субстратное ингибирование пептидами с гидрофобным остатком в Р2-положении, а также ярко выраженная зависимость субстратных характеристик этого фермента от влияния ионов кальция. Предположено наличие в молекуле PSP объемного гидрофобного субстрат-связывающего центра, а также значительных конформационных перестроек активного центра фермента при связывании Ca2+ и образовании фермент-субстратного комплекса. Температурные характеристики PSP – высокая активность при низких температурах и низкий кажущийся температурный оптимум (25°) подтверждают, что этот фермент является психрофильным.