БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 12, с. 1712–1719

УДК 577.21.577.151

Рекомбинантная ДНК-метилтрансфераза M1.BspACI из Bacillus psychrodurans AC: получение и свойства

© 2010 М.В. Тарасова, В.В. Кузнецов, Н.А. Нетесова, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: ДНК-метилтрансфераза, Bacillus psychrodurans, ферментативная кинетика.

Аннотация

Cистема рестрикции-модификации Bacillus psychrodurans AC (сайт узнавания 5′-CCGC-3′) содержит две ДНК-метилтрансферазы: M1.BspACI и M2.BspACI. Ген bspACIM1 клонировали в составе вектора pJW2 и экспрессировали в клетках Escherichia coli. Высокоочищенный препарат фермента M1.BspACI получили путем очистки в пять хроматографических стадий. M1.BspACI проявляет максимальную активность при 30°, pH 8. Фермент модифицирует первый остаток цитозина в последовательности узнавания 5′-CCGC-3′. Каталитическая константа реакции метилирования ДНК ферментом M1.BspACI равна 0,095 мин–1, Km для ДНК фага λ – 0,053 мкМ, Km для S-аденозил-L-метионина – 5,1 мкМ.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha