БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 11, с. 1577–1582
УДК 577.152.3
Доказательство важности консервативных аминокислотных остатков для активности белкового ингибитора трипсина из Delonix regia
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: ингибитор трипсина из Delonix regia, ингибитор трипсина семейства Кунитца, Delonix regia, реактивный участок, сайтспецифический мутагенез.
Аннотация
Молекула ингибитора трипсина из Delonix regia (DrTI) состоит из одной полипептидной цепи с молекулярной массой 22 кДа и содержит две дисульфидные связи (Cys44–Cys89 и Cys139–Cys149). Сравнение аминокислотной последовательности DrTI с последовательностями других растительных ингибиторов трипсина семейства Кунитца показывает, что он содержит в реактивном участке отрицательно заряженный остаток Glu68, а не Arg или Lys, как большинство ингибиторов этой группы. В результате сайтспецифического мутагенеза получены мутантные формы DrTI, содержащие замены в области реактивного участка молекулы и в области дисульфидных мостиков. Анализ показал, что замены Glu68→Leu или Glu68→Lys сопровождались потерей 95–96% активности ингибитора. Это дало возможность предположить, что именно остаток Glu68 находится в реактивном участке DrTI и некоторых других ингибиторов трипсина из растений. Замена Cys139→Gly приводила к потере активности ингибитора, тогда как замена Cys44→Gly на активности не отражалась. Полученные данные свидетельствуют о том, что дисульфидная связь Cys139–Cys149 необходима для проявления антитрипсиновой активности ингибитора, в то время как связь Cys44–Cys89 для активности DrTI не важна.