БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 8, с. 1170–1180
УДК 576.32.36: 582.282.23
Точечные мутации в Pma1 H+-ATPазе дрожжей Saccharomyces cerevisiae: влияние на ее экспрессию и активность
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: дрожжи, плазматическая мембрана, секреторные везикулы, АТРаза, трансмембранный сегмент, тепловой шок, сайт-направленный мутагенез.
Аннотация
Pma1 Н+-АТРаза дрожжей – ключевой фермент энергетического обмена, генерирующий электрохимический градиент протонов на плазматической мембране и играющий важную роль в поддержании ионного гомеостаза дрожжевой клетки. Ранее нами с помощью сайт-направленного мутагенеза были произведены точечные замены всех 21 аминокислотных остатков, образующих трансмембранный сегмент М8 в этом ферменте, на Ala (Guerra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1768, 2383–2392, 2007). В работе представлены новые данные о роли этих остатков в структурно-функциональной организации АТРазы и устойчивости клеток и фермента к действию теплового шока. Мутации Q798A и I799A летальны для клетки при экспрессии АТРазы как в секреторных везикулах, так и плазматических мембранах. Мутация F796A вызывала чувствительность дрожжей к тепловому шоку при экспрессии фермента в секреторных везикулах, а мутация I794A вызывала чувствительность клеток к тепловому шоку при экспрессии фермента как в секреторных везикулах, так и в плазматических мембранах (хотя и в меньшей степени). E803A не оказывала существенного влияния на температурную чувствительность клеток и АТРазы, однако сдвигала равновесие между конформационными состояниями фермента Е1 и Е2 в сторону Е1.