БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 8, с. 1111–1119
УДК 577.152.3
Новая ациламидаза из Rhodococcus erythropolis ТА37, способная гидролизовать N-замещенные амиды
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Rhodococcus erythropolis, амидаза, N-замещенные амиды, акриламид, N-ацетиламинокислоты.
Аннотация
Выделена и охарактеризована новая ациламидаза из Rhodococcus erythropolis ТА37, субстратами которой являются N-замещенные акриламиды – изопропилакриламид, N,N-диметил-аминопропилакриламид, метилен-бис-акриламид, п-нитроанилиды кислот – 4′-нитроацетанилид, Gly-pNA, Ala-pNA, Leu-pNA, N-ацетилпроизводные аминокислот глицина, аланина, лейцина. Фермент также использует в качестве субстратов алифатические амиды – ацетамид, акриламид, изобутирамид, н-бутирамид, валерамид, хотя и с меньшей эффективностью. Масса субъединицы фермента по результатам Ds-Na-ПААГ составила 55 кДа. Максимальная активность фермента наблюдается при рН 7–8 и температуре 55°. Фермент стабилен при 22° в течение 15 ч, при 45° в течение получаса. Константа Михаэлиса Кm c Gly-pNA составляет 0,25 мМ, с Ala-pNA – 0,55 мМ. Активность ациламидазы подавляется ингибиторами сериновых протеаз – ФМСФ и ДИФФ, и не подавляется ингибиторами алифатических амидаз – ацетальдегидом и нитрофенилдисульфидами. N-концевая аминокислотная последовательность ациламидазы высоко гомологична N-концевым последовательностям двух предполагаемых амидаз, обнаруженных при секвенировании геномов Rhodococcus erythropolis. Предполагается, что ациламидаза вместе с обнаруженными гомологами являются представителями нового класса внутри семейства GGSS амидаз.