БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 8, с. 1091–1097
УДК 547.963.3
Выделение и кристаллизация химерной Qβ-репликазы, содержащей фактор элонгации EF-Ts Thermus thermophilus
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: репликация РНК, РНК-зависимая РНК-полимераза, рибосомный белок S1, факторы элонгации EF-Tu и EF-Ts, двухплазмидная система экспрессии, кристаллизация белка, стабильность структуры.
Аннотация
Qβ-репликаза – белковый комплекс, ответственный за репликацию геномной РНК бактериофага Qβ – содержит, помимо кодируемой фагом каталитической β-субъединицы, три белка клетки-хозяина (Escherichia coli): факторы элонгации EF-Tu и EF-Ts, а также рибосомный белок S1. Нам удалось получить химерную Qβ-репликазу, в которой EF-Ts E. coli заменен на EF-Ts из Thermus thermophilus. Химерный белок образуется в клетках E. coli при коэкспрессии генов, кодирующих β-субъединицу репликазы и термофильный EF-Ts. Разработана процедура, позволяющая получить практически гомогенный препарат химерной репликазы. В отличие от фермента дикого типа, лишенная белка S1 химерная репликаза оказалась способной к кристаллизации. Полученный результат открывает перспективы исследований структуры Qβ-репликазы и механизма распознавания ею реплицирующихся РНК, способных размножаться in vitro с рекордной скоростью.