БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 7, с. 1014–1022
УДК 577.151
Характеристика рекомбинантной фруктозо-1,6-бисфосфатальдолазы термотолерантного метанотрофа Methylococcus capsulatus Bath
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: фруктозо-1,6-бисфосфатальдолаза, метанотрофы, Methylococcus capsulatus, цикл Кальвина.
Аннотация
Ген fba из термотолерантного облигатного метанотрофа Methylococcus capsulatus Bath клонирован и экспрессирован в Escherichia coli BL21 (DE3). Фруктозо-1,6-бисфосфатальдолаза (ФБА) с шестью гистидинами на С-конце очищена аффинной металл-хелатной хроматографией. Показано, что ФБА Mc. capsulatus Bath является гомогексамером (240 кДа), активируется Со2+ и ингибируется ЭДТА. Значение Km для фруктозо-1,6-бисфосфата ниже значения Km для субстратов реакции альдольной конденсации диоксиацетонфосфата и глицеральдегид-3-фосфата. ФБА катализирует также расщепление седогептулозо-1,7-бисфосфата. Присутствие Со2+ в реакционной смеси влияет на кинетические параметры гидролиза и сопровождается ингибирующим действием 2 мМ фруктозо-1,6-бисфосфата на активность фермента. Филогенетически фермент Mc. capsulatus Bath принадлежит к Б-типу класса II альдолаз и имеет высокую идентичность с ФБА из автотрофных бактерий. Обсуждается роль ФБА в метаболизме Mc. capsulatus Bath, ассимилирующего углерод метана посредством трех путей фиксации С1-соединений: рибулозомонофосфатного, рибулозобисфосфатного и серинового циклов.