БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 7, с. 992–1000
УДК 577.152.3
Выделение и некоторые свойства транскетолазы человека
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: транскетолаза человека, тиаминдифосфат, индуцированная оптическая активность, КД.
Аннотация
Методом гетерологичной экпрессии гена транскетолазы человека в клетках Escherichia coli в препаративных количествах получена рекомбинантная (His)6-транскетолаза человека (hTK). Фермент выделен в виде холофермента и гомогенен согласно данным Ds-Na-ПААГ-электрофореза; отработан метод получения апофермента. Показано, что количество активной транскетолазы в выделенном препарате белка коррелирует с количеством определяемого в ней TDP. Методом КД показано наличие индуцированной оптической активности, которая позволяет исследовать связывание TDP с апоферментом и регистрировать транскетолазную реакцию постадийно. Охарактеризована односубстратная реакция, катализируемая hTK, с использованием только субстрата-донора в отсутствие субстрата-акцептора. Определены значения константы Михаэлиса для TDP и для пары физиологических субстратов: ксилулозо-5-фосфата и рибозо-5-фосфата.