БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 7, с. 978–983
УДК 577.15.07
Рекомбинантная 9-липоксигеназа кукурузы: экспрессия, очистка, свойства
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: 9-липоксигеназа кукурузы, экспрессия 9-липоксигеназы, хроматография 9-липоксигеназы, ГХ/МС-анализ, ВЭЖХ.
Аннотация
Оптимизирована экспрессия 9-липоксигеназы кукурузы в клетках Escherichia coli Rosetta(DE3)pLysS. Чистота рекомбинантного белка, полученного хроматографией на Q-Sepharose и Octyl-Sepharose при 4°, составляет >95%. Максимальная скорость реакции диоксигенирования линолевой кислоты наблюдается при рН 7,5. Определена стабильность фермента при рН 4,5–9,5, а также в присутствии фенилметансульфонилфторида, β-меркаптоэтанола, сульфата аммония и глицерина. Методами ВЭЖХ и ГХ/МС показано, что фермент продуцирует 99% 9S-гидроперекиси из линолевой кислоты. 13-Гидроперекись (<1%) представляла собой смесь S- и R-энантиомеров в соотношении 2 : 3.