БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 7, с. 966–977
УДК 577.112.855
Состояние онкомаркерного белка В23/нуклеофозмина в клетках HeLa
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: нуклеофозмин, мономеры, олигомеры, HeLa, изоформы, структура.
Аннотация
Методом Вестерн-блоттинга с применением для разделения белков денатурирующего Ds-Na-ПААГ-электрофореза выявлено, что на иммуноблотах лизатов клеток HeLa нуклеофозмин детектируется в виде двух окрашенных полос, соответствующих мономерам (38–40 кДа) и олигомерам (210–230 кДа) белка. Показано, что уменьшение ионной силы буферов при инкубации клеток и ядер приводит к распаду олигомеров. Впервые установлено, что в ядрах клеток HeLa существует два пула белка В23, различающихся по чувствительности к обработке ядер буферами низкой ионной силы, – экстрагируемый из ядер и неэкстрагируемый, прочно связанный с ядрышками. Экстрагируемый пул белка был подвергнут детальному структурному анализу. На основании анализа С-концевых аминокислотных последовательностей с помощью карбоксипептидаз впервые идентифицированы близкие по структуре изоформы В23.1 и В23.2. Обнаружено, что N-концевые аминокислотные остатки обеих изоформ блокированы ацетильной защитой. Анализ результатов секвенирования деацетилированных препаратов позволил впервые установить, что N-концевой участок изоформ укорочен на девять аминокислотных остатков, а ацетилированным является остаток серина. Показано, что при добавлении ионов Mg к буферу низкой ионной силы и увеличении ионной силы буфера укороченная форма нуклеофозмина, представляющая собой лишь экстрагируемый пул белка В23, образует олигомеры с молекулярными массами, подобными обнаруженным у олигомеров полного лизата клеток (210–230 кДа), однако наборы этих олигомеров различаются. Разработанная нами стратегия характеризации структурных форм белка В23 может быть использована для анализа его состояния в других опухолевых клетках.