БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 6, с. 868–877
УДК 577.212.3
Аффинное выделение минимального фермента РНК-полимеразы Escherichia coli
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: РНК-полимераза E. coli, субъединицы, аффинная хроматография, IMPACT-система, транскрипция, аминокислоты.
Аннотация
Разработана методика получения высокоочищенного препарата минимального (кор-) фермента РНК-полимеразы E. coli на основе IMPACT-технологии и индуцируемой свободными аминокислотами диссоциации комплекса РНК-полимеразы с σ70-субъединицей. Показано, что промывка иммобилизованной РНК-полимеразы 5–10 мМ раствором глутамата, pH 5–5,5, позволяет полностью удалить σ70-субъединицу из холофермента и уменьшить количество белковых примесей. Продемонстрирована возможность реконструкции полного (холо-) фермента РНК-полимеразы непосредственно на аффинной колонке. Активность получаемых препаратов кор-фермента РНКП проверена в реакции транскрипции in vitro. Показано влияние ряда аминокислот и их смесей на транскрипцию in vitro. Полученные данные свидетельствуют о том, что наблюдаемые изменения эффективности транскрипции в присутствии аминокислот связаны со специфическим нарушением взаимодействия σ70-субъединицы с кор-ферментом.