БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 6, с. 827–838
УДК 615.074
Тромбопластин, иммобилизованный на полистироловой поверхности, обладает кинетическими характеристиками, близкими к таковым для нативного белка, и активирует свертывание крови in vitro аналогично тромбопластину на фибробластах
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: тромбопластин, тканевой фактор, иммобилизация, кинетика комплекса фактор VIIa – тромбопластин, пространственная динамика свертывания крови.
Аннотация
Описан метод иммобилизации трансмембранного белка – тромбопластина (тканевого фактора) на полистироловой поверхности. Этот фактор является главным активирующим фактором, запускающим процесс свертывания крови. Он является кофактором фактора VIIa – первой протеазы в каскаде протеолитических реакций свертывания. Предложенный метод сохраняет кинетические характеристики фактора, свойственные для нативного тканевого фактора на поверхности фибробластов. Кинетика связывания с фактором VIIa и ферментативной активности образующегося комплекса подчиняются кинетике Михаэлиса–Ментен, что характерно и для нативного комплекса. Небольшое отличие состоит в том, что константа диссоциации для тканевого фактора, иммобилизованного на полистироловую поверхность, в 2,7 раз больше, чем для нативного. Предлагаемый метод иммобилизации обеспечивает плотность белка на активирующей поверхности, соответствующей плотности тканевого фактора на поверхности фибробластов. Иммобилизированный тканевой фактор может быть использован для активации свертывания крови в методах, имитирующих пространственную динамику роста тромба in vitro. Исследование в этом направлении позволит регистрировать как гипо-, так и гиперкоагуляционные состояния системы. Этот подход выгодно отличается от традиционных методов оценки состояния системы свертывания, регистрирующих, в основном, только гипокоагуляцию. Исследование времени хранения показало, что активаторы с иммобилизованным тканевым фактором можно хранить и использовать в методе по изучению пространственной динамики образования фибринового сгустка минимум 100 дней.