БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 5, с. 682–688
УДК 576; 595.143.6
Белок-липидные частицы секрета слюнных желез медицинской пиявки, их размеры и морфология
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: секрет слюнных желез медицинской пиявки, сканирующая электронная микроскопия, трансмиссионная электронная микроскопия, конфокальная лазерная сканирующая микроскопия, неионные детергенты, липиды, холестерол.
Аннотация
Впервые определены взаимное расположение белков и липидов в составе частиц секрета слюнных желез (ССЖ) медицинской пиявки, их пространственная ориентация, размеры и морфология. При исследовании сканирующей и трансмиссионной электронной микроскопией (СЭМ и ТЭМ) установлено, что ССЖ представляет собой частицы различых размеров и форм, что подтверждается также данными конфокальной лазерной сканирующей микроскопии препаратов ССЖ, обработанных флуоресцеин-изотиоцианатом. После инкубации с неионными детергентами (Brij 35 и Tween 20) ТЭМ фиксирует разобщение фрагментов, составляющих белок-липидные частицы; при этом отмечается повышение концентрации доступного белка. Зондирование липидов в препаратах ССЖ периленом показало, что они сконцентрированы внутри частицы и практически отсутствуют на поверхности. Однако холестерин, обнаруживаемый при зондировании ССЖ Cholesteryl-Bodipy (гидрофобным флуоресцеирующим аналогом холестерина), в большей степени, чем липиды, фиксируется на поверхностных срезах при конфокальном анализе электронных микрофотографий ССЖ. Этот анализ выявил в составе белок-липидных частиц секрета структуры, внешне напоминающие кавеолы, заполненные холестерином. Предварительно замороженный при –70° ССЖ при визуализации методом ТЭМ представляется в виде множества мелких дисперсных частиц одинакового размера, фиксированное расположение которых напоминает кристаллическую структуру воды.