БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 5, с. 664–674
УДК 577.322.24;72
Механизм стероидогенного электронного транспорта: роль консервативного остатка Glu429 в дестабилизации комплекса цитохром Р45011A1/адренодоксин
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: цитохром P450, цитохром P45011A1, цитохром P45011B2, гетерологическая экспрессия, электронный транспорт, направленный мутагенез, белок-белковые взаимодействия.
Аннотация
Установлена роль консервативного остатка E429 цитохрома P45011A1 во взаимодействии с адренодоксином. Показано, что нейтрализация заряда E429Q приводит к трехкратному уменьшению Kd и Vmax по сравнению с таковыми у цитохрома Р450 дикого типа, свидетельствуя о том, что более сильное взаимодействие цитохрома P45011A1 и адренодоксина может быть причиной нарушения процесса диссоциации окисленного адренодоксина, образующегося после переноса электрона на цитохром Р450, из комплекса с гемопротеидом. Установлено, что комплекс цитохрома P45011A1 и адренодоксина стабилизируется в основном за счет электростатических взаимодействий и низкая каталитическая активность мутанта E429Q практически полностью восстанавливается до уровня активности белка дикого типа посредством увеличения ионной силы. Нейтрализация заряда соответствующего остатка цитохрома P45011A1 приводит к аналогичному эффекту: активность мутанта цитохрома P45011A1 уменьшается в 10 раз, но восстанавливается до исходной при увеличении ионной силы без изменения соотношения образующихся продуктов реакции. Таким образом, это первое указание на участие аминокислотного остатка цитохрома Р450 в регуляции диссоциации комплекса редокс-белков цитохром Р450-зависимых электрон-транспортных цепей.