БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 4, с. 582–587
УДК 577.112
Продукция биологически активного гемангиопоэтина человека клетками бактерии Escherichia coli
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: E. coli, ферментация, гемангиопоэтин, Ni-нитрилотриуксусная кислота (Ni-НТУК), очистка, SUMO.
Аннотация
В целях разработки высокоэффективных способов получения гемангиопоэтина человека (hGAP) синтезирован и клонирован ген этого белка в составе вектора pSUMO. Кодируемый рекомбинантным геном гибридный белок содержал «метку» SUMO в N-концевой части молекулы. Полученный вектор экспрессии был трансфицирован в клетки E. coli штамма BL21 (DE3). Гибридный белок получен в растворимой форме и идентифицирован методом Ds-Na-ПААГ-электрофореза и Вестерн-блоттинга. Гибридный белок выделен хроматографией на металлхелатирующем аффинном носителе, выход белка составил 45 мг на один литр ферментируемой культуры, чистота препарата – 90%. Аминокислотная последовательность SUMO была впоследствии удалена с помощью специфической протеазы. Реакцию протеолиза проводили при комнатной температуре в течение 1 ч, белок hGAP дополнительно очищали методом металл-аффинной хроматографии. Из одного литра ферментируемой культуры получен 21 мг белка с чистотой препарата не менее 95%. Очищенный рекомбинантный гемангиопоэтин обладал способностью стимулировать пролиферацию клеток эндотелия умбиликальной вены человека.