БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 4, с. 565–570
УДК 577.218
Экспрессия и очистка гибридного белка HMGB1ABOX-TMD1 – нового антагониста HMGB1
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: гибридный белок, высокомобильный групповой белок box 1 (HMGB1), тромбомодулин.
Аннотация
Высокомобильный групповой белок box 1 (HMGB1) – летальный медиатор системной воспалительной реакции, его домен A-box является антагонистом HMGB1. Для увеличения уровня экспрессии HMGB1 и анти-HMGB1 действия кДНК домена A-box соединили с последовательностью, кодирующей лектин-подобный домен тромбомодулина (TMD1). Гибридная ДНК была лигирована с прокариотическим экспрессионным вектором pQE-80L для получения рекомбинантной плазмиды pQE80L-A/TMD1, которая затем была трансформирована в бактерии Escherichia coli DH5α. Уровень экспрессии гибридного белка достигал 40% от общего количества белка в клетке. После очистки гибридного белка с помощью хроматографии на Ni-NTA колонке (чистота составила ~95%) и пропускания через колонку с полимиксином В для удаления оставшихся липополисахаридов белок проверили на антивоспалительное действие. Показано, что A/TMD1 в значительной степени ингибирует выход TNF-α, индуцированный HMGB1, и поэтому может быть полезен при лечении разновидностей сепсиса с повышенным уровнем HMGB1.