БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 3, с. 457–464
УДК 577.152.34
Анализ стабильности структуры и функций L-аспарагиназы из Pyrococcus furiosus
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Pyrococcus furiosus, L-аспарагиназа, гипертермофил, химическая денатурация, моделирование по гомологии, ферментативная кинетика.
Аннотация
Представлены результаты исследования L-аспарагиназы из Pyrococcus furiosus, экспрессированной в клетках Escherichia coli. Анализ стабильности белка и кинетических параметров ферментативных реакций показал, что в нативных условиях фермент образует димер, обладает термостабильностью и не обладает глутаминазной активностью. Отмечено, что максимальная активность фермента наблюдается при pH 9,0, Km = 12 мM, ингибирование реакции – при концентрации L-аспарагина >20 мM. Установлено, что мочевина не приводит к денатурации фермента и его инактивации, однако в присутствии гуанидингидрохлорида наблюдается двухступенчатый профиль денатурации. Снижение активности фермента при низких концентрациях гуанидингидрохлорида (1 М) и изменение его спектра КД в ближнем УФ-свете свидетельствует об изменениях третичной структуры его активного сайта. Построена трехмерная модель, основанная на гомологии, анализ которой совместно с анализом активности и стабильности позволил сделать важные выводы об аспарагиназе.