БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 3, с. 400–410
УДК 577.152.361
Исследование ингибирования F1-ATPазы Escherichia coli 7-хлор-4-нитробензо-2-окса-1,3-диазолом в присутствии MgADP и MgATP подтверждает двуцентровый механизм гидролиза АТР ферментом
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: ATP-синтаза, каталитическая кооперативность, двуцентровый катализ, трицентровый катализ, связывание нуклеотидов, активация анионами.
Аннотация
На основании влияния MgADP и MgATP на скорость ингибирования фермента 7-хлор-4-нитробензо-2-окса-1,3-диазолом (NBD-Cl) определено их связывание с F1-ATPазой Escherichia coli (EcF1). Установлено, что в низких концентрациях MgADP способствует ингибированию, тогда как в более высоких концентрациях защищает EcF1 от ингибирования, а мутанту βY331W-EcF1 для защиты требуется MgADP в значительно более высоких концентрациях. Такое связывание MgADP не может быть обнаружено методом тушения флуоресценции. Отмечено, что MgATP частично защищает EcF1 от инактивации NBD-Cl, но фермент остается чувствительным к NBD-Cl в присутствии MgATP в концентрации до 10 мМ. Обнаружено, что активирующий анион селенит в отсутствие MgATP частично защищает EcF1 от ингибирования NBD-Cl, а полная защита EcF1 от ингибирования NBD-Cl наблюдается в присутствии обоих эффекторов – MgATP и селенита. Результаты служат подтверждением двуцентрового каталитического механизма гидролиза MgATP F1-ATPазами и позволяют предположить, что стимуляция ферментативной активности активирующими анионами происходит в результате связывания аниона с каталитическим центром, который остается незаняты при насыщающей концентрации субстрата.