Твердофазные системы для исследования углеводной специфичности галектинов

Аннотация

Наши недавно проведенные исследования показали, что углеводсвязывающий паттерн галектинов в составе клеточной поверхности отличается от паттерна, определяемого в искусственных (бесклеточных) тест-системах. Чтобы понять причину обнаруженного несовпадения, мы сравнили между собой несколько искусственных твердофазных тест-систем, отличающихся в первую очередь способом иммобилизации/презентации галектина на твердой фазе. Было установлено, что наиболее информативна система, в которой связывание галектина (исследовались галектины-1 и -3 человека) с иммобилизованным на пластик гликопротеином асиалофетуином ингибировали полиакриламидными конъюгатами Glyc-PAA; данный подход позволяет количественно ранжировать гликаны (Glyc) по их аффинности к галектину и изучать как высоко-, так и низкоаффинные гликаны. В то же время попытки имитировать клеточную систему на твердой фазе не привели к успеху. В клеточном тесте галектин связывался с гликоконъюгатами клетки одним из своих углеводсвязывающих доменов (УСД), после чего оставшийся несвязанным УСД был изучен с помощью серии флуоресцентно-меченных Glyc-PAA. В «имитационном» варианте, когда галектины нагружали на сорбированный асиалофетуин или Glyc-PAA, а затем выявляли вторым Glyc-PAA, связывания либо не наблюдалось, либо гликаны плохо ранжировались в отличие от ингибиторного варианта. При сорбировании галектина на антитела (когда все УСД остаются свободными для узнавания углевода) разрешение кривых их связывания с Glyc-PAA хорошее, паттерны специфичности близки (хотя и не полностью идентичны) для двух методов, но данная система не отображает клеточную ситуацию. Кроме перечисленных трех проверено еще несколько вариантов твердофазного анализа специфичности галектинов. Полученные данные позволяют лучше понять механизм и последствия цис-маскировки УСД галектинов на клеточной поверхности.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: