БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 2, с. 256–263
УДК 577.355.2
Исследование стабильности мутантного фотосинтетического реакционного центра Rhodobacter sphaeroides I(L177)H и установление местоположения бактериохлорофилла, ковалентно связанного с белком
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: бактериальный фотосинтез, Rhodobacter sphaeroides, реакционный центр, направленный мутагенез, бактериохлорофилл, координирование магния, стабильность мембранных белков.
Аннотация
Ранее нами было показано, что в результате мутации I(L177)H в реакционном центре (РЦ) фотосинтеза бактерии Rhodobacter sphaeroides произошло ковалентное связывание одного из бактериохлорофиллов (БХл) с L-субъединицей, при этом была отмечена повышенная стабильность координирования центрального атома магния бактериохлорофилла, связанного с белком. В данной работе исследованы спектральные свойства РЦ дикого типа и I(L177)H в присутствии мочевины и додецилсульфата натрия, а также при 48°. Показано, что мутация I(L177)H привела к снижению стабильности РЦ. В денатурирующих условиях в спектрах РЦ I(L177)H наблюдаются изменения, свидетельствующие о нарушении олигомерной структуры комплекса и потере взаимодействия пигментов с их белковым окружением. Кроме того, в присутствии додецилсульфата натрия в обоих типах РЦ происходит феофитинизация бактериохлорофиллов, однако в спектре мутантного РЦ в этих условиях остается полоса при 811 нм, что свидетельствует о сохранении одного из БХл в белковом сайте связывания и стабильном координировании его центрального атома магния. Показано, что в обоих типах РЦ мономерный БХл ВВ может быть модифицирован обработкой борогидридом натрия и затем экстрагирован ацетон-метанольной смесью. Спектральные свойства БХл, ковалентно связанного с белком РЦ I(L177)H, при этом не изменяются. Полученные результаты демонстрируют, что молекулой БХл, прочно связанной с L-субъединицей в мутантном РЦ, является молекула БХл РА, как и предполагалось ранее.