БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 2, с. 247–255
УДК 577.112
Изучение SelW-дефицитных клеток in vitro показало, что селенопротеин W не является ферментом антиоксидантной системы
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: селенопротеин W, интерференция РНК, антиоксидантная функция, мышечные клетки in vitro.
Аннотация
Для выяснения роли селенопротеина W (SelW) в качестве участника антиоксидантной системы клетки проведено исследование состояния окислительно-восстановительного гомеостаза клеток скелетных мышц in vitro в присутствии и отсутствие этого белка. Уменьшение уровня экспрессии селенопротеина W было достигнуто путем трансфекции в клетки линии C2C12 (C3H), происходящие из скелетных мышц мышей, небольших фрагментов интерферирующей синтетической двуспиральной РНК. Изучение свойств полученных видоизмененных клеток проводили методами ПЦР в режиме реального времени, Вестерн-блоттинга, проточной цитофлуорометрии и флуоресцентного окрашивания, а также с помощью теста на содержание глутатиона и путем оценки жизнеспособности клеток. Установлено, что уровень экспрессии мРНК селенопротеина W и его содержание в модифицированных клетках снижались на 62,1 и 72,4% соответственно. Помимо этого, в SelW-дефицитных клетках развивался острый токсикоз и апоптоз, причем, степень апоптоза достигала ~37%. Активность глутатионпероксидазы, супероксиддисмутазы, каталазы, а также общая антиоксидантная активность и содержание глутатиона в трансфицированных SelW-дефицитных клетках были повышены на 47,6, 103,0, 31,0, 205,6 и 30,0% соответственно (P < 0,05). Таким образом, селенопротеин W принимает участие в процессах окисления-восстановления в мышечных клетках. Однако недостаток этого белка может быть скомпенсирован повышением активности ферментов антиоксидантной системы и поэтому окислительный стресс не является причиной апоптоза в клетках с дефицитом SelW. Таким образом, показано, что основная роль селенопротеина W в мышечных клетках не связана с его функционированием в качестве компонента антиоксидантной системы.