БИОХИМИЯ, 2010, том 75, вып. 1, с. 78–87
УДК 577.152.2
Субстратная специфичность и биохимические свойства ДНК-метилтрансферазы М3.BstF5I из системы рестрикции–модификации BstF5I
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: ДНК-метилтрансфераза, ферментативная кинетика, сайтспецифичность.
Аннотация
Определены оптимальные условия метилирования ДНК ферментом M3.BstF5I из Bacillus stearothermophilus и установлены кинетические параметры реакции модификации ДНК фага λ и ряда олигонуклеотидных субстратов. Сравнение кинетических параметров M1.BstF5I и M3.BstF5I показало, что при близких температурных оптимумах и сродстве к ДНК M3.BstF5I в оптимальных условиях имеет примерно в 4 раза меньшее число оборотов (0,24 мин–1) и модифицирует полуметилированный сайт узнавания менее эффективно, чем неметилированный. В отличие от трех других метилаз системы рестрикции–модификации BstF5I фермент M3.BstF5I способен дополнительно модифицировать неканоническую последовательность ДНК 5′-GGATC-3′ со скоростью, которая более чем на порядок меньше скорости метилирования канонического сайта узнавания ДНК 5′-GGATG-3′.