БИОХИМИЯ, 2009, том 74, вып. 12, с. 1631–1641

УДК 578.233.22:578.833

Картирование рецепторного домена для вирусов венесуэльского энцефалита лошадей и клещевого энцефалита на C-конце ламининсвязывающего белка человека*

© 2009 А.А. Малыгин 1, Е.И. Бондаренко 2, В.А. Иванисенко 3, Е.В. Протопопова 2, Г.Г. Карпова 1, В.Б. Локтев 2**

Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН

ФГУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»

Институт цитологии и генетики СО РАН

Поступила в редакцию 17.03.2009
После доработки 25.05.2009

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: ламининсвязывающий белок, рецепторный домен, антиидиотипические антитела, пептиды, TEDWS, вирус клещевого энцефалита, вирус Венесуэльского энцефалита лошадей.

Аннотация

Поликлональные и моноклональные антитела (МКА) к ламининсвязывающему белку (ЛСБ) человека способны высокоэффективно блокировать проникновение некоторых альфа- и флавивирусов в клетку. Для более детального исследования механизма этого процесса использована панель из 13 типов МКА против рекомбинантного ЛСБ человека. Конкурентный анализ показал, что МКА к ЛСБ можно разделить на 6 различных групп конкуренции. МКА 4F6 и 8E4, отнесенные к 3 и 4 группам конкуренции, подавляют репликацию вируса Венесуэльского энцефалита лошадей, что указывает на их взаимодействие с рецепторным доменом ЛСБ, обеспечивающим связывание с вирусными частицами. Методами иммуноферментного анализа и иммуноблоттинга установлено, что поликлональные антиидиотипические антитела к МКА 4F6 и 8E4, моделирующие паратопы рецепторного домена ЛСБ, способны специфически взаимодействовать с белком Е2 Венесуэльского энцефалита лошадей и белком Е вируса клещевого энцефалита. Картирование мест связывания МКА 4F6 и 8E4 с ЛСБ посредством конструирования коротких делеционных фрагментов молекулы ЛСБ человека показало, что МКА 8E4 взаимодействуют с фрагментом 187–210 а.о., а МКА 4F6 – с 263–278 а.о. белка ЛСБ, который представлен двумя повторами TEDWS, разделенными между собой четырьмя аминокислотными остатками. Это позволило установить, что рецепторный домен ЛСБ, взаимодействующий с вирусным белками Е2 Венесуэльского энцефалита лошадей и Е вируса клещевого энцефалита, расположен на C-концевом фрагменте молекулы ЛСБ. Предложена модель пространственной структуры рецепторного домена ЛСБ, дистально ограниченного четырьмя линейными петлями, две из которых представлены экспериментально картированными районами 187–210 и 263–278 а.о., и центральным β-складчатым районом, переходящим в α-спиральный участок, включающим 200–216 а.о. молекулы ЛСБ и обеспечивающим взаимодействие с молекулой ламинина-1.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha

Сноски

* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Press, BM09-090, 13.09.2009.

** Адресат для корреспонденции.