БИОХИМИЯ, 2009, том 74, вып. 10, с. 1427–1437

УДК 577.152.3

Олигопептидаза В из Serratia proteamaculans. I. Определение первичной структуры, выделение и очистка природного и рекомбинантного фермента

© 2009 Р.Ф. Хайруллин 1, А.Г. Михайлова 1*, Т.Ю. Себякина 1, Н.Л. Лубенец 1, Р.Х. Зиганшин 1, И.В. Демидюк 2, Т.Ю. Громова 2, С.В. Костров 2, Л.Д. Румш 1

1 Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

2 Институт молекулярной генетики РАН

Поступила в редакцию 26.11.2008
После доработки 19.01.2009

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: олигопептидаза В, трипсин, Serratia proteamaculans, GroEL, экспрессия рекомбинантного белка.

Аннотация

Из психротолерантного грамотрицательного микроорганизма Serratia proteamaculans с помощью ионообменной хроматографии на Q-сефарозе и аффинной хроматографии на иммобилизованном основном панкреатическом ингибиторе трипсина BPTI-сефарозе получена новая трипсиноподобная протеиназа (PSP). Обнаружено, что PSP находится в прочном комплексе с шаперонином GroEL. Разработан метод разрушения комплекса GroEL c PSP. Получены электрофоретически гомогенные препараты PSP с молекулярной массой 78 кДа. Определена N-концевая аминокислотная последовательность (10 остатков) и проведен масс-спектральный анализ пептидов трипсинолиза PSP. Показано, что данный фермент является ранее неизвестной олигопептидазой В (OpdB). Секвенирован ген OpdB S. proteamaculans 94 и сконструирован продуцент Escherichia coli BL-21 (DE3) pOpdB № 22. Выход рекомбинантного PSP составляет 150 мг из 100 г биомассы.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha

Сноски

* Адресат для корреспонденции.