БИОХИМИЯ, 2009, том 74, вып. 10, с. 1416–1426
УДК 576.32/.36:582.282.23
Функционирование Pma1 H+-АТРазы дрожжей Saccharomyces cerevisiae с минимальным набором цистеиновых остатков
1 Department of Genetics, Yale University School of Medicine
2 Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН
Поступила в редакцию 10.10.2008
После доработки 05.05.2009
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: АТРаза, плазматическая мембрана, секреторные везикулы, дрожжи, цистеин, сайт-направленный мутагенез.
Аннотация
Pma1 Н+-АТРаза плазматических мембран Saccharomyces cerevisiae – первичный протонный насос, генерирующий электрохимический градиент протонов, являющийся источником энергии для вторичных транспортных систем. Этот фермент содержит девять цистеиновых остатков, три из которых (Cys-148, Cys-312 и Cys-867) находятся в трансмембранных сегментах, остальные (Cys-221, Cys-376, Cys-409, Cys-472, Cys-532 и Cys-569) – в частях молекулы, обращенных в цитозоль. Хотя замещение любого из цистеинов на аланин не приводит к существенным дефектам в функционировании АТРазы, замена всех остатков вызывает потерю активности и нарушение биогенеза фермента. С помощью сайт-направленного мутагенеза в сочетании с другими молекулярно-биологическими и биохимическими методами в настоящей работе определены различные сочетания минимального набора цистеиновых остатков в молекуле АТРазы, позволяющие сохранять фермент функционально активным.