Агглютинин из Clitoria ternatea в индуцированном кислотой компактном состоянии сохраняет биологическую активность^*

Аннотация

Агглютинин из Clitoria ternatea при различных значениях pH исследовали методами спектроскопии, гель-фильтрационной хроматографии и измерения углеводной специфичности. Флуоресцентный анализ и КД-спектры в ближнем УФ-диапазоне показали, что при pH 2,6 агглютинин из C. ternatea теряет четкую третичную структуру. В то же время КД-спектры в дальнем УФ-диапазоне показали, что нативная вторичная структура сохраняется на 50%. На графике pH-зависимости средней эллиптичности аминокислотных остатков при 217 нм видно, что при pH 4,0 происходит структурный переход с потерей вторичной структуры, приводящий к образованию развернутого под действием кислоты состояния молекулы белка. По сравнению с состоянием, в которое приходит белок под действием 6 М хлорида гуанидиния, данное состояние менее денатурировано. При дальнейшем понижении pH у этого развернутого состояния на ~75% восстанавливается вторичная структура (pH 1,2), образуется А-состояние белка с КД-спектром в ближнем УФ-диапазоне, подобным спектру нативного белка. Белок в А-состоянии активно связывал 8-анилино-1-нафталинсульфонат, что свидетельствует о конформации, подобной «расплавленной глобуле», с экспонированными гидрофобными остатками. Гашение люминесценции с помощью акриламида показало, что доступность триптофана для гасителя понижена; можно предположить, что при низких значениях pH конформация белка компактная. Гель-фильтрационная хроматография показала присутствие компактного интермедиата с гидродинамическими размерами, соответствующими мономеру. Тепловая денатурация белка в нативном состоянии – кооперативная и проходит в одну стадию, в то время как тепловая денатурация белка в А-состоянии – некооперативная и двухстадийная. У белка в А-состоянии углеводсвязывающая активность восстанавливается на 72%.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: