РНК-зависимая РНК-полимераза вируса гепатита C: изучение ингибирования производными α,γ-дикетокислот^*

Аннотация

α,γ-Дикетокислоты (DKAs), как полагают, подавляют активность РНК-зависимой РНК-полимеразы вируса гепатита C за счет комплексообразования с каталитическими ионами Mg²⁺ в активном центре фермента. Однако α,γ-дикетокислоты демонстрируют неконкурентный тип ингибирования по отношению к NTP-субстрату, что противоречит предложенному механизму. Мы исследовали канал входа NTP-субстрата и активный центр РНК-зависимой РНК-полимеразы вируса гепатита C на предмет возможного взаимодействия с α,γ-дикетокислотами. Замены R48A, K51A и R222А многократно усиливали ингибирующее действие α,γ-дикетокислот и одновременно с этим увеличивали значения K_m UTP-субстрата. Интересно, что замена C223A единственная среди прочих снижала значение K_m(UTP), но также повышала эффективность ингибирования. Полученные результаты позволили смоделировать комплекс фермента с ингибитором. Согласно предложенной модели α,γ-дикетокислоты привносят дополнительный ион Mg²⁺ в активный центр фермента на стадии образования фосфодиэфирной связи, в результате чего происходит смещение трифосфатного остатка NTP-субстрата в каталитически неактивную моду связывания. Данный механизм, в отличие от принятого, в настоящее время объясняет неконкурентный тип ингибирования.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: