Слияние барназы с VH-доменом антиферритинового антитела F11 приводит к формированию частично разупорядоченного функционально активного белка

Аннотация

Химерный белок VH-барназа был получен в результате объединения VH-домена моноклонального антитела F11, специфичного к ферритину человека, и барназы, бактериальной РНКазы из Bacillus amyloliquefaciens. В процессе рефолдинга из телец включения практически весь химерный белок формировал нерастворимые агрегаты. Агрегация была значительно уменьшена добавлением очищенных шаперонов GroEL/GroES либо аргинина, что привело к 10–12-кратному увеличению выхода растворимого белка. Согласно данным сканирующей калориметрии, флуоресцентной и КД-спектроскопии, конформация белка, сформированная с помощью шаперонов или аргинина, идентична конформации, полученной без добавок, что свидетельствует о независимости конформации VH-барназы от условий рефолдинга. В результате фолдинга VH-барназа формирует единственный калориметрически определяемый домен с конформацией, подобной «расплавленной» глобуле и включающей близкую к нативной вторичную структуру и компактную третичную конформацию с частично экспонированными растворителю гидрофобными участками и низкой термодинамической стабильностью. Необычным свойством VH-барназы является ее способность, несмотря на частично разупорядоченную конформацию и формирование единственного «калориметрического домена», сохранять обе активности – антигенсвязывающую и РНКазную, принадлежащие двум гетерологическим доменам.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: