БИОХИМИЯ, 2009, том 74, вып. 1, с. 95–102
УДК 577.218
Эффективная экспрессия GLUT1, GLUT2 и GLUT3 человека в Schizosaccharomyces pombe*
1 College of Bioengineering, Chongqing University
2 Beijing Research Center of Agro-Biotechnology
Поступила в редакцию 07.05.2008
После доработки 28.05.2008
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: GLUT, Schizosaccharomyces pombe, экспрессия мембранных белков, GST-аффинная хроматография.
Аннотация
В делящихся дрожжах Schizosaccharomyces pombe в составе химерного белка с глутатион-S-трансферазой (GST) экспрессированы три представителя подсемейства локализованных на поверхности клеток человека рецепторов (GLUT1, GLUT2 и GLUT3), содержащих 12 трансмембранных доменов. Для экспрессии этих химерных белков использован полноразмерный промотор nmt1 (Pnmt1) S. pombe. Отмечено, что уровень транскрипции гибридных белков GST-GLUT после ее индукции удалением тиамина из среды очень высок. Одноэтапная очистка рекомбинантных гибридных белков достигнута с использованием GST-аффинной хроматографии. Из 3 г дрожжей (сырой вес; 1 л культуры) получено ~300 мкг высокоочищенного химерного белка, что свидетельствует о возможности эффективных экспрессии и очистки мембранных белков человека с использованием делящихся дрожжей. Доступность генетической информации и простота генетических манипуляций делают делящиеся дрожжи наиболее эффективным средством для экспрессии мембранных белков эукариот.
Текст статьи
Сноски
* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Press, BM08-163, 09.11.2008.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.