БИОХИМИЯ, 2009, том 74, вып. 1, с. 39–46

УДК 577.354.171

Измененное взаимодействие изолированных рецепторов инсулин/IGF по сравнению с мембраносвязанными рецепторами*

© 2009 O. Недич **, Р. Масникоза

Institute for the Application of Nuclear Energy, University of Belgrade

Поступила в редакцию 12.02.2008
После доработки 14.04.2008

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: инсулин, инсулиноподобные факторы роста, рецепторы, аффинная хроматография, эксперименты по связыванию лигандов.

Аннотация

Инсулин и инсулинoподобные факторы роста (IGF) связываются со своими родственными рецепторами с высоким сродством, но по причине их гомологичности могут перекрестно реагировать на рецепторы друг друга. Проведена серия экспериментов по связыванию, чтобы заново проанализировать перекрестную реактивность инсулина, IGFI и IGFII с рецепторами аффинно-очищенного инсулина (IR) и рецепторами IGF второго типа (IGF-2R) из плацентарных мембран человека. IR и IGF-2R очищали с помощью инсулин- и маннозо-6-фосфат-аффинной хроматографии (I-AC и M6P-AC). Эксперименты по связыванию проведены с 125I-меченными и немечеными лигандами. Согласно иммуноблоттингу единственным видом рецептора, изолированного с помощью I-AC, был IR, тогда как единственным рецептором, изолированным с помощью M6P-AC, был IGF-2R. Изолированный IR реагировал в одинаковой степени с 125I-инсулином и с 125I-IGFII и в значительно меньшей степени с 125I-IGFI, что подразумевает преобладание IR-A. Сродство рецептора IR по отношению к гетерологичным лигандам возрастает после его отделения от других мембранных белков. Очищенный с помощью аффинной хроматографии IGF-2R был почти не способен связывать лиганды в экспериментальных условиях, используемых в этой работе, но если перед аффинной хроматографией его инкубировали с 125I-лигандами, то IGF-2R взаимодействовал не только с IGFII, но до некоторой степени и с другими двумя лигандами. Как гомологичные, так и гетерологичные лиганды зависимым от дозы образом ингибировали при конкурентной M6P-AC связывание меченых лигандов. В конкурентном лиганд-блоттинге все немеченые лиганды, хотя и в разной степени, также ингибировали специфические взаимодействия между 125I-инсулином и IR и между 125I-IGFII и IGF-2R. На основании результатов, представленных в этой работе, можно заключить, что выделение рецепторов IR и IGF-2R из их мембранной среды увеличивает их реакционную способность по отношению ко всем лигандам из семейства инсулин/IGF.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha

Сноски

* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Press, BM08-050, 09.11.2008.

** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.