БИОХИМИЯ, 2008, том 73, вып. 10, с. 1422–1428
УДК 577.152.342
Остаток Leu254 и ионы кальция – новые структурные детерминанты субстратной специфичности карбоксипептидазы Т*
ФГУП ГосНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов
Поступила в редакцию 17.04.2008
После доработки 13.05.2008
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: карбоксипептидаза Т, субстратная специфичность, рациональный редизайн, белковая инженерия, сайтнаправленный мутагенез.
Аннотация
С помощью методов стационарной кинетики и сайт-направленного мутагенеза обнаружены новые детерминанты субстратной специфичности карбоксипептидазы Т (КПТ) Thermoactinomyces vulgaris: структурные ионы кальция и остаток Leu254. Удаление ионов кальция изменило профиль селективности гидролиза трипептидных субстратов с C-концевыми Leu, Glu и Arg c 64/1,7/1 до 162/1,3/1. Замена гидрофобного Leu254 в КПТ на полярный Asn не отразилась на эффективности гидролиза субстратов с C-концевыми Leu и Arg, однако привела к более чем 28-кратному падению активности на субстрате с C-концевой Glu. Показано, что остаток His68 не является структурной детерминантой специфичности КПТ.
Текст статьи
Сноски
* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Press, BM08-144, 14.09.2008.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.