Защитный эффект белковых регуляторов комплемента человека (hDAF и hMSP) усиливается при их совместной экспрессии в клетках млекопитающих с помощью IRES-содержащего дицистронного вектора

Аннотация

Отмечено, что белки, регулирующие конвертазу фактора C3 комплемента человека (фактор ускорения распада (hDAF, CD55) и мембранный кофакторный белок (hMCP, CD46)), функционально дополняют друг друга и при введении путем трансфекции в ксеногенные клетки млекопитающих придают им устойчивость к комплементу человека. Это может послужить основой для разработки эффективных способов защиты клеток от повреждений, вызываемых комплементом. Получен дицистронный специфичный для клеток млекопитающих вектор экспрессии pcDNA3-MPCIRESDAF, в составе которого находится внутренний участок связывания с рибосомой (IRES), происходящий из генома вируса энцефаломиокардита. С использованием G418 отобраны устойчивые линии трансфицированных клеток. Методом полимеразной цепной реакции подтверждена интеграция введенных внешних генов в геном трансфицированных клеток. Методом полимеразной цепной реакции с использованием обратной транскриптазы, а также методом Вестерн-блоттинга показано, что полинуклеотидная последовательность emcvIRES способствует эффективной экспрессии генов hMSP и hDAF в клетках NIH3T3 после трансфекции с помощью вектора pcDNA3-MCPIRESDAF. Обнаружено также, что защита клеток от лизиса, вызываемого комплементом сыворотки человека, была более эффективна в случае, когда оба белка DAF и MCP экспрессировались одновременно. Результаты дают возможность предположить, что DAF и MCP действуют в синергизме друг с другом, полинуклеотидная последовательность IRES, входящая в состав полицистронного вектора экспрессии, способствует повышению эффективности доставки в клетки мультигенных комплексов. Полученный вектор экспрессии pcDNA3-MCPIRESDAF обладает потенциальными возможностями для использования в терапии в целях контроля активации системы комплемента.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: