Сравнительный анализ антирестрикционной активности белков ArdA (ColIb-P9) и Ocr (T7)

Аннотация

Антирестрикционные белки ArdA и Ocr специфически ингибируют ферменты рестрикции-модификации I типа. Проведено клонирование генов ardA (конъюгативная плазмида ColIb-P9) и 0.3 (ocr) (бактериофаг Т7) в мультикопийном векторе pUC18 под промотором P_lac. Показано, что белки ArdA (ColIb-P9) и Ocr (T7) эффективно ингибируют как рестрикционную (эндонуклеазную), так и модификационную (метилазную) активности фермента EcoKI. Проведено клонирование генов ardA, 0.3 (ocr) и luxCDABE Photorhabdus luminescens в векторах серии pZ со строго регулируемым промотором P_ltetO-1 под контролем репрессора TetR. Показано, что в зависимости от концентрации индуктора ангидротетрациклина в среде интенсивность биолюминесценции клеток Escherichia coli K12 MG1655Z1 tetR⁺ (pZE21-luxCDABE) и, соответственно, внутриклеточная концентрация люциферазы варьирует в 5000 раз. Проведены измерения эффективности антирестрикционной активности белков ArdA и Ocr в клетках MG1655 Z1, содержащих гибридные плазмиды серии pZ с соответствующими генами, и при таких же концентрациях индуктора экспрессии генов. Согласно полученной биолюминесцентным методом калибровочной кривой определены относительные значения внутриклеточных концентраций белков ArdA и Ocr, а также K_d для комплексообразования этих белков с ферментом EcoKI. Показано, что K_d (ArdA) примерно в 1700 раз превышает K_d (Ocr) и составляет 1,7 · 10^–7 М.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: