Анализ РНК-расщепляющей активности РНК-полимераз E. coli и D. radiodurans^*

Аннотация

РНК-полимераза способна осуществлять как синтез, так и расщепление РНК. Обе реакции осуществляются одним каталитическим центром, содержащим два иона магния, связанных с тремя остатками аспарагиновой кислоты абсолютно консервативного мотива NADFDGD β’-субъединицы РНК-полимеразы. В данной работе показано, что РНК-полимераза D. radiodurans расщепляет РНК с большей скоростью, чем РНК-полимераза E. coli (различия составляют примерно 15 раз при 20°). В то же время данные РНК-полимеразы не различаются по скорости синтеза РНК. В последовательностях данных РНК-полимераз, непосредственно прилегающих к NADFDGD-мотиву, имеется единственная аминокислотная замена (Glu751 у D. radiodurans по сравнению с Ala455 у E. coli), которая локализуется во вторичном канале фермента и могла бы влиять на скорость расщепления РНК. Введение соответствующей замены в РНК-полимеразу E. coli приводит к некоторому увеличению скорости расщепления (в 2–3 раза), но не влияет на синтез РНК. Таким образом, различия в скорости расщепления РНК РНК-полимеразами E. coli и D. radiodurans, вероятно, определяются многими аминокислотными заменами, которые не влияют на скорость синтеза РНК и расположены в нескольких участках активного центра.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: