Создание, синтез, очистка и оценка активности одноцепочечных антител к простагландин-D-синтазе человека

Аннотация

Синтезирована активная одноцепочечня форма (ScFv) мышиного моноклонального антитела 4A7, специфичного к простагландин-D-синтазе липокалинового типа (L-PGDS) в Escherichia coli. С использованием обратной транскрипции из препарата РНК, выделенного из гибридомы 4A7, продуцирующей моноклональные антитела (МАК) к простагландин-D-синтазе (IgG1), получены фрагменты кДНК, кодирующие вариабельные области тяжелой (VH) и легкой (VL) цепей, Полученные фрагменты, соединенные линкером, кодирующим последовательность (Gly₄Ser)₃, были клонированы в вектор pGEM, которым трансформировали клетки E. coli. Синтезированные в бактериальных клетках рекомбинантные ScFv-фрагменты были очищены на колонках с Ni²⁺ с последующим анализом чистоты и активности полученного препарата при помощи электрофореза в Ds-Na-ПААГ и иммуноферментного анализа (ELISA). Получены данные, свидетельствующие о том, что специфичность узнавания и связывания со сперматозоидами одноцепочечных ScFv-фрагментов 4А7 идентична таковым родительских моноклональных антител 4A7.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: