Хеликаза/NTPаза вируса гепатита C: эффективная система экспрессии и новые ингибиторы^*

Аннотация

Разработан метод получения рекомбинантного полноразмерного белка NS3 вируса гепатита C с выходом 6,5 мг/л клеточной культуры и оптимизированы условия измерения его NТРазной и хеликазной активностей. Показано, что хеликазная реакция может протекать в двух режимах в зависимости от соотношения концентраций фермента и субстрата: в некаталитическом АТР-независимом при избытке фермента, и в каталитическом при десятикратном избытке субстрата. В последнем случае хеликазная активность сопряжена с NТРазной и стимулируется АТР. Исследован ряд аналогов NТР и неорганического пирофосфата в качестве субстратов и/или ингибиторов NТРазной активности белка NS3 и показано, что структура нуклеинового основания и рибозного фрагмента молекулы NTP мало сказывается на его ингибиторных (субстратных) свойствах. Установлено, что среди производных нуклеотидов наиболее эффективный ингибитор NТРазной реакции – 5′-фосфорил-β,γ-гипофосфат 2′-дезокситимидина, а среди аналогов пирофосфата максимальную ингибирующую активность проявлял иминодифосфат. Эти соединения исследованы как ингибиторы хеликазной реакции и показано, что иминодифосфат эффективно ингибирует АТР-зависимую хеликазную реакцию, практически не оказывая воздействия на АТР-независимое расплетание дуплекса. В то же время ингибирующее действие 5′-фосфорил-β,γ-гипофосфата 2′-дезокситимидина было незначительным в обоих случаях, что, вероятно, связано с возможностью активации хеликазы данным аналогом ATP.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: