Использование динамического метода спин-метки для изучения комплекса барстар–барназа

Аннотация

Для исследования белок-белкового взаимодействия на примере комплекса фермента барназы (Бн) и его ингибитора барстара использован динамический метод спин-метки. Двумя разными спин-метками, различающимися протяженностью и структурой гибкого линкера, модифицирован мутантный барстар С40А (Бс), содержащий единственный аминокислотный остаток цистеина. Обнаружено, что каждая спин-метка избирательно присоединяется к остатку C82, находящемуся вблизи области контакта Бн и Бс. Установлено, что образование прочного белкового комплекса между Бн и спинмеченным Бс сопровождается существенным ограничением подвижности спин-меток, о чем свидетельствует наличие заметных изменений в регистрируемых спектрах ЭПР. Отмечено, что значение параметра «упорядоченность» как оценка быстрой переориентации спин-метки относительно молекулы белка резко увеличивается, приближаясь к единице. При этом время вращательной корреляции спинмеченного Бс и его комплекса с Бн в растворе в обоих случаях точно соответствует молекулярным массам. Эти данные свидетельствуют о том, что как Бс, так и комплекс Бн–Бс – «жесткие» белковые образования. При этом спин-метки, присоединенные к барстару в непосредственной близости от интерфейса взаимодействия с барназой, испытывают независимо от своей структуры сильное ограничение подвижности под влиянием ближайшего к ним окружения в области контакта двух белков. Данный подход может быть использован при исследовании сложных конструкций слитных белков, содержащих Бн или Бс.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: