Проапоптозный белок из Xenopus laevis: клонирование, экспрессия, очистка и создание поликлональных антител

Аннотация

PNAS-4 человека был идентифицирован как белок, принимающий участие в апоптозе клеток млекопитающих. Аналог PNAS-4 (названный xPNAS-4) из Xenopus laevis – модельного организма, используемого для изучения функционирования генов в процессе эмбриогенеза был клонирован в E. coli с последующей экспрессией, очисткой и получением к нему поликлональных антител. Рекомбинантный xPNAS-4-белок с гистидиновым концом синтезировался в E. coli в виде нерастворимых телец включения, которые растворяли в 8 M мочевине с последующей очисткой с помощью Ni²⁺-аффинной хроматографии. Рефолдинг денатурированного белка проводили постепенно уменьшая концентрацию мочевины с помощью диализа. Очищенный белок был идентифицирован с помощью жидкостной хроматографии с электроспрей-ионизационной квадрупольной времяпролетной масс-спектрометрией (LC-ESI-Q-TOF-MS) и использован для получения поликлональных антител к PNAS-4 из X. laevis. Рекомбинантный PNAS-4 и антитела к нему могут быть использованы для изучения роли этого белка в апоптозе. Впервые (насколько известно) показано присутствие PNAS-4 в X. laevis.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: