Cтруктурные основы широкой субстратной специфичности карбоксипептидазы Т Thermoactinomyces vulgaris. Воссоздание кармана первичной специфичности карбоксипептидазы В

Аннотация

С помощью сайт-направленного мутагенеза по активному центру карбоксипептидазы Т (КпТ) Thermoactinomyces vulgaris, способной гидролизовать как гидрофобные, так и положительно заряженные субстраты, получены пять мутантов: КпТ1 (A243G), КпТ2 (D253G/T255D), КпТ3 (A243G/D253G/T255D), КпТ4 (G207S/A243G/D253G/T255D) и КпТ5 (G207S/A243G/T250A/D253G/T255D), последовательно воссоздающих карман первичной специфичности карбоксипептидазы В (КпВ). Все полученные мутанты сохранили субстратную специфичность, присущую КпТ дикого типа. Причиной этого могут быть различия в природе и пространственном положении остатков Leu 247 и Ile 247, His 68 и Asp 65 у КпТ и КпВ, соответственно, а также в расположении молекулы воды, связанной с Ala 250. Способность КпТ отщеплять гидрофобные аминокислотные остатки может быть объяснена наличием дополнительного гидрофобного участка, образованного Y248, L247, L203, A243, CH3-группой T250, СО-группами Y248 и A243.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: