Удаление N-концевой части способствует синтезу растворимой формы глутаредоксина цианобактерий в Escherichia coli

Аннотация

Отмечено, что глутаредоксин участвует в поддержании нормального тиол-дисульфидного баланса в клетке, а также в регенерации белков, поврежденных радикалами кислорода. Для исследования этих важных регуляторных белков у цианобактерий клонирован первый ген глутаредоксина цианобактерий ssr2061 и экспрессирован соответствующий белок в Escherichia coli. Клонирован также второй ген глутаредоксина slr1562 и экспрессирован соответствующий белок. Обнаружено, что 90% белка Grx2061, кодируемого геном ssr2061, синтезируется в растворимой форме, в то время как 90% белка Grx1562, кодируемого геном slr1562, накапливается в телах включения. Для получения растворимой формы белка Grx1562 созданы две мутантные формы: Grx1562NC с заменой цистеинов в консервативном участке на серины и Grx1562M с делецией N-концевого гидрофобного участка. Показано, что только мутантный белок Grx1562M синтезировался в растворимой форме, характеризовался повышенной глутаредоксиновой активностью и пониженной чувствительностью к окислительному стрессу. Спектроскопический анализ показал, что структура Grx1562M менее гидрофобна, что может способствовать получению растворимой формы белка и улучшить его каталитическую активность. Результаты свидетельствуют о том, что гидрофобный N-концевой участок обусловливает нерастворимость белка Grx1562, а также могут способствовать разработке новой стратегии повышения уровня экспрессии гетерологичных белков в E. сoli в растворимой форме.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: