БИОХИМИЯ, 2007, том 72, вып. 2, с. 212–222
УДК 577.212.3
Система для гетерологичной экспрессии и выделения РНК-полимеразы E. coli и ее компонентов*
1 НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского МГУ им. М.В. Ломоносова
2 Химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 19.09.2006
После доработки 16.10.2006
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: РНК-полимераза E. coli, субъединицы, аффинная хроматография, IMPACT-система, транскрипция.
Аннотация
Сконструирован набор плазмидных векторов для гетерологичной экспрессии в клетках E. coli всех основных субъединиц РНК-полимеразы E. coli в виде «слитых» белков с интеиновым и хитинсвязывающим доменами, обеспечивающими возможность их выделения с использованием IMPACT-технологии. Показано, что в составе слитых белков субъединицы α, β или β’ вместе с природными α, β, β’ и σ субъединицами способны участвовать в сборке РНК-полимеразы in vivo и обеспечивать ее последующее аффинное выделение. Продемонстрирована функциональная активность выделяемых таким путем препаратов РНК-полимеразы в реакциях транскрипции и образования специфических комплексов с промотором. По IMPACT-технологии σ70-субъединицу можно получать в виде чистого препарата без примеси РНК-полимеразы.
Текст статьи
Сноски
* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Press, BM06-237, 14.01.07.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.