БИОХИМИЯ, 2007, том 72, вып. 2, с. 194–202

УДК 577.152

Клонирование, характеристика и изучение экспрессии соматотропина буйвола (Bubalus bubalis)

© 2007 С. Садаф 1,2,3, М.А. Хан 2, Д.В. Вильсон 3, М.В. Ахтар 2*

1 Institute of Biochemistry and Biotechnology, University of the Punjab

2 School of Biological Sciences, University of the Punjab

3 Department of Molecular Biology and Genetics, Cornell University

Поступила в редакцию 28.08.2006
После доработки 30.09.2006

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: соматотропин, последовательность нуклеотидов, Т7-lac-промотор, сверхэкспрессия, рефолдинг, пролиферация клеток Nb2.

Аннотация

В работе описаны клонирование, экспрессия и характеристика гена соматотропина (СТ) буйвола породы Nili–Ravi (BbCT). Проведена амплификация и сиквенс кодирующих, некодирующих и промоторных участков BbCT. Сравнительный анализ данных секвенирования BbCT и генов, кодирующих СТ других позвоночных, выявил несколько молчащих и две функциональных точечных мутации, в частности замену консервативного Glu на Arg. Сконструирована плазмида для экспрессии BbCT в Escherichia coli BL21 (RIPL) CodonPlus, под контролем IPTG-индуцируемого Т7-lac-промотора. Была проведена оптимизации последовательности BbCT для экспрессии в клетках E. сoli. Белок синтезировался в форме телец включения, которые составляли около 20% клеточных белков. Была проведена очистка белка с последующей проверкой биологической активности. Примененная система экспрессии и методика очистки могут быть использованы для дальнейшего изучения структуры и функции BbCT и применены в животноводстве.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha

Сноски

* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.