БИОХИМИЯ, 2007, том 72, вып. 1, с. 118–127
УДК 577.152.361
АТР как эффектор неорганической пирофосфатазы Escherichia coli. Роль остатка Lys112 в связывании эффекторов
1 Химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова
2 НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского МГУ им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 01.08.2006
После доработки 06.09.2006
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: пирофосфатаза, АТР, PPi, центр связывания, эффектор, сайт-направленный мутагенез.
Аннотация
Показано, что PPi, метилендифосфонат и АТР являются эффекторами неорганической пирофосфатазы Escherichia coli (Е-РРазы) и конкурируют за связывание в аллостерическом регуляторном центре. По данным химической модификации и компьютерного моделирования структуры комплекса фермента с АТР выявлен ряд аминокислотных остатков, которые предположительно участвуют в связывании эффектора. Получены мутантные варианты Е-РРазы с заменами Lys112Gln, Lys112Gln/Lys148Gln и Lys112Gln/Lys115Ala, а также Е-РРаза, химически модифицированная по аминогруппе остатка Lys146 диальдегидным производным АТР (Adwt РРаза). Анализ их кинетических свойств и сравнение их с полученными ранее мутантными вариантами Lys115Ala, Arg43Gln и Lys148Gln подтверждают предположение о том, что эффекторный центр расположен в кластере положительно заряженных аминокислот, включающем в себя боковые группы Arg43, Lys146 (субъединица А), Lys112 и Lys115 (субъединица В). При этом Lys112, по-видимому, играет ключевую роль в связывании фосфатной группы всех трех изученных эффекторов.
Текст статьи
Сноски
* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.