БИОХИМИЯ, 2007, том 72, вып. 1, с. 91–99
УДК 577.023+577.322.23
Конструирование, экспрессия, выделение и физико-химическая характеристика химерного белка HMWb5-EGFP*
Институт биоорганической химии НАН Беларуси,
Поступила в редакцию 10.07.2006
После доработки 11.09.2006
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: микросомальный цитохром b5, зеленый флуоресцирующий белок (EGFP) из Aequorea, экспрессия в Escherichia coli, аффинная хроматография, очистка.
Аннотация
Приведены физико-химические характеристики, а также результаты конструирования, гетерологической экспрессии в клетках Escherichia coli, выделения и очистки искусственного химерного белка HMWb5-EGFP, состоящего из полноразмерного цитохрома b5 (HMWb5) и зеленого флуоресцирующего белка (EGFP) из Aequorea. Оптимизацией условий экспрессии химерного белка достигнут уровень экспрессии вплоть до 1500 нмоль на 1 л культуры. Рекомбинантный химерный белок HMWb5-EGFP выделен и очищен из солюбилизата клеточных мембран с помощью металлоаффинной хроматографии, обладает физико-химическими, спектральными и флуоресцентными свойствами цитохрома b5 и EGFP, что указывает на независимый характер фолдинга двух белков в составе химеры. Показано, что в химерном белке HMWb5-EGFP наблюдается синглет-синглетный перенос энергии от флуорофора EGFP к гему HMWb5, а расстояние между хромофорами двух белков в сшитом комплексе составляет 67,3 Å. Отмечено, что химерный белок HMWb5-EGFP, сконструированный в настоящей работе, является перспективной моделью современных биосенсоров и инструментом в исследовании белок-белковых взаимодействий.
Текст статьи
Сноски
* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Press, BM06-183, 10.12.2006.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.