Аргининкиназа Stichopus japonicus и креатинкиназа мышц кролика, объединенные в двух слитых белках

Аннотация

Экспрессией генов АК и КК, слитых в разной последовательности, были получены два продукта слияния димерной аргининкиназы (АК) морского огурца и димерной креатинкиназы (КК) мышц кролика, названные АК-КК и КК-АК. Отмечено, что по сравнению с ферментами дикого типа как АК-КК, так и КК-АК сохраняли ~50% активности АК и КК, а значение K_m для аргинина и креатина вырастало примерно в 2 раза. Методами кругового дихроизма в дальнем УФ, собственной флуоресценции белков, флуоресценции связанного 1-анилиннафтален-8-сульфоната и гель-хроматографии проведено сравнение структур АК, КК, АК-КК и КК-АК. Обнаружено, что, несмотря на эволюционную близость, димерные АК и КК различаются по молекулярным массам, по положениям максимумов флуоресценции и по степени экспонированности гидрофобных поверхностей белка. В результате сравнения титрования гуанидингидрохлоридом (ГднHCl) структурной и термодинамической стабильностей АК, КК, АК-КК и КК-АК, а также анализа влияния ГднHCl на активность АК или КК установлено, что димерная АК более зависима от кооперативности двух субъединиц, чем КК. Кроме того, АК и КК характеризуются разными кривыми денатурации, индуцируемой ГднHCl, но практически одинаковой термодинамической стабильностью. Отмечено, что два слитых белка (АК-КК и КК-АК) имеют сходные вторичную и третичную структуры, молекулярные массы, структурную и термодинамическую стабильности. Следовательно, порядок экспрессии генов АК и КК незначительно влияет на характеристики слитых белков.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: