БИОХИМИЯ, 2006, том 71, вып. 8, с. 1091–1102
УДК 577.152.1
Экспрессия цитохрома P450scc в клетках Escherichia coli: внутриклеточная локализация и взаимодействие с бактериальными редокс-белками*
1 НИИ физико-химических проблем БГУ
2 НИИ физико-химической биологии им. А.Н.Белозерского МГУ им. Ломоносова
Поступила в редакцию 21.03.2006
После доработки 28.04.2006
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: цитохром P450scc, Escherichia coli, встраивание в мембрану, функциональное сопряжение.
Аннотация
В качестве модели для изучения топогенеза цитохрома P450scc использовали клетки Escherichia coli, экспрессирующие зрелую форму цитохрома P450scc из митохондрий коры надпочечников быка. Рекомбинантный P450scc выявлен как в мембранной, так и в растворимой фракциях, полученных центрифугированием клеточного гомогената в стандартных условиях. Методом гель-проникающей ЖХВД установлено, что в растворимой фракции цитохром P450scc находится исключительно в составе частиц размером более 400 кДа. Эти данные, подтвержденные методами аффинной хроматографии и кинетическими измерениями, позволяют предполагать, что частицы, содержащие цитохром Р450scc, представляют собой сложные липопротеиновые структуры. Растворимый цитохром Р450scc в клетках E. coli не обнаружен, следовательно, встраивание в мембрану является необходимой стадией формирования холофермента. При добавлении NADPH цитохром Р450scc в растворимой фракции подвергается одноэлектронному восстановлению и катализирует превращение 22R-гидроксихолестерина в прегненолон. Таким образом, впервые показана возможность функционального сопряжения цитохрома Р450scc млекопитающих с электрон-транспортной системой бактерий.
Текст статьи
Сноски
* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Press, BM06-070, 11.06.06.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.