БИОХИМИЯ, 2006, том 71, вып. 7, с. 972–983
УДК 577.322.23
Экспрессия цитохрома b5 внешней мембраны митохондрий в Escherichia coli. Выделение рекомбинантного гемопротеида и исследование взаимодействия с белками-партнерами*
1 Институт биоорганической химии НАН Беларуси
2 Department of Biochemistry, University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas
Поступила в редакцию 24.01.2006
После доработки 23.02.2006
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: микросомальный цитохром b5, цитохром b5 внешней митохондриальной мембраны, экспрессия в Escherichia coli, аффинная хроматография, очистка белков.
Аннотация
Приведены результаты экспрессии в Escherichia coli и выделении полноразмерной формы рекомбинантного цитохрома b5 внешней мембраны митохондрий, а также характеристика этой формы. Оптимизацией условий экспрессии цитохрома b5 внешней митохондриальной мембраны достигнут уровень экспрессии вплоть до 104 нмоль гемопротеида на 1 л культуры. Рекомбинантный цитохром b5 внешней митохондриальной мембраны выделен и очищен из солюбилизата клеточных мембран с помощью металлоаффинной хроматографии, обладает физико-химическими, спектральными и иммунохимическими свойствами цитохрома b5 внешней митохондриальной мембраны крысы. Иммобилизованный рекомбинантный цитохром b5 внешней митохондриальной мембраны использован в качестве аффинного лиганда для хроматографии электрон-транспортных белков. Показано, что при взаимодействии NADPH : цитохром Р450-редуктазы и изоформ цитохрома b5 важную роль играют гидрофобные контакты между белками, хотя вклад этих взаимодействий в комплексообразование NADPH : цитохром Р450-редуктазы с изоформами цитохрома b5 различен.
Текст статьи
Сноски
* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Press, BM06-014, 23.04.2006.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.