Влияние поли(ADP-рибозо)-полимеразы-1 и ее апоптотического 24-кДа фрагмента на репарацию ДНК-дуплексов в ядерном экстракте из семенников крупного рогатого скота^*

Аннотация

Исследовано влияние экзогенных белков, PARP1 и ее протеолитического фрагмента с молекулярной массой 24 кДа (p24), на процесс репарации ДНК-дуплексов, содержащих однонуклеотидную брешь с фуранофосфатной или фосфатной группой на 5′-конце запирающего праймера, в ядерном экстракте из семенников крупного рогатого скота. Установлено, что репарация таких повреждений должна проходить по длинно- или короткозаплаточному пути эксцизионной репарации оснований (ЭРО) соответственно. Отмечено, что экзогенные PARP1 и p24 снижают эффективность синтеза ДНК при заполнении бреши для обоих дуплексов, но не оказывают влияния на стадию лигирования при репарации ДНК-дуплекса по короткозаплаточному пути. В тех же условиях данные белки подавляют синтез ДНК с вытеснением цепи и снижают эффективность эндонуклеазной реакции, катализируемой FEN1 в ядерном экстракте, блокируя репарацию ДНК-дуплекса по длиннозаплаточному пути. При использовании фотоактивируемых ДНК-субстратов, имитирующих ДНК-интермедиаты ЭРО с одноцепочечным разрывом, обнаружено снижение эффективности фотоиндуцируемого присоединения белков экстракта к ДНК в присутствии экзогенных PARP1 и p24. Сделан вывод, что PARP1 и p24 взаимодействуют с ДНК-интермедиатами ЭРО и конкурируют с белками ядерного экстракта за связывание ДНК. Показано, что взаимодействие PARP1 и p24 с ДНК-интермедиатами длиннозаплаточного способа ЭРО приводит к подавлению последующих стадий репарации, протекающих по этому механизму. Однако при восстановлении интактной структуры ДНК-дуплекса по короткозаплаточному пути PARP1 и p24 в меньшей степени подавляют процесс репарации однонуклеотидной бреши и не влияют на ее конечную стадию – лигирование.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: